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一氧化氮检测试剂盒的样品处理方法

更新时间:2023-01-23 点击次数:703次
  一氧化氮检测试剂盒适合于检测细胞内的一氧化氮水平,可以进行实时检测。如果收集细胞后再装载探针,通常至少可以检测100个样品。
  采用改进格里斯法将硝酸盐还原为亚硝酸盐后,准确测定NO的量。格里斯分析机理为重氮类之间的偶氮耦合,重氮类是由磺胺和NO2-和N-(1-萘基)乙二胺二丨盐丨酸丨盐产生的,产生与NO代谢物成正比的比色(540 nm)产物。NO在体内或水溶液中易氧化生成NO2—,在酸性条件下,NO2—与重氮盐磺酸胺生成重氮化合物,进一步与萘基乙烯基二胺偶合,产物在550nm处有特征吸收峰,测定其吸光值,可以计算NO含量。
  样品处理方法:
  1.组织:按照组织质量(克):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1克组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆。10000克,4℃离心15分钟,取上清,置冰上待测。
  2.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3分钟);然后10000克,4℃,离心15分钟,取上清置于冰上待测。
  3.体液和培养液等其它液态样品:直接测定。

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